ИНСТРУКЦИЯ ПО СБОРУ, ХРАНЕНИЮ И ТРАНСПОРТИРОВКЕ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Правила взятия, хранения и транспортировки биоматериала заболеваний для выявления возбудителей методом ПЦР

1.1. Общие рекомендации

1.1.1. Взятие биоматериала производится из предполагаемого места обитания микроорганизмов и развития инфекции.

1.1.2. Количество забранного материала должно быть небольшим. Избыток отделяемого, слизь и гной отрицательно влияют на качество выделения ДНК и способствуют деградации ДНК при хранении и транспортировке.

1.1.3. При внесении биоматериала, взятого у пациента зондом с ватным тампоном или щеточкой, в пробирку типа эппендорф с транспортным раствором, необходимо:

• соблюдать стерильность;
• прежде, чем погружать собранный на тампоне (щеточке) биоматериал в раствор, размазать его по сухой стенке пробирки, затем смочить тампон (щеточку) в растворе и, вращая зонд, тщательно смыть весь материал со стенки пробирки и тампона (щеточки);
• по возможности отжать тампон о стенку пробирки, удалить зонд с тампоном (щеточкой) и закрыть пробирку.

* В цветные пробирки типа эппендорф с транспортным раствором можно забирать только мазки и соскобы. Не допускается забор других видов биоматериала в данные пробирки.

1.2. Способы взятия биоматериала для исследований методом ПЦР

1.2.1. Соскобы
Для соскобов используются одноразовые стерильные зонды, имеющие ватный тампон с повышенной адсорбцией или «щеточки», реже - ложки Фолькмана, малые ушные ложки или аналогичные инструменты со слегка затупленными краями. Поскабливающими движениями собрать материал. Исследуемый материал должен содержать возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи, примесей крови и экссудата. Внести материал в стерильную пробирку типа эппендорф с транспортным раствором (см. раздел 1.1.).
Соскоб из цервикального канала: перед взятием соскоба необходимо удалить избыток слизи стерильным ватным тампоном, обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором. Зонд ввести в цервикальный канал на глубину 0,5-1,5 см, избегая соприкосновения со стенками влагалища, и поскабливающим движением (не до крови) собрать материал. Небольшое количество эритроцитов в пробе не влияет на результат анализа. При наличии эрозии шейки матки материал берут с границы здоровой и измененной ткани.
Соскоб из уретры: зонд ввести в уретру (у мужчин - на глубину 2-4 см) и несколькими вращательными движениями собрать материал. Накануне взятия материала допускается провокация (острая пища, алкоголь и др.). Рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1-2-х ч. перед взятием пробы. При наличии обильных гнойных выделений соскоб надо брать не позже, чем через 15 минут после мочеиспускания.
Соскоб с конъюнктивы берут, предварительно проведя анестезию глаза 0,5% раствором дикаина. Вывернув веко, зондом с ватным тампоном (либо глазным скальпелем) собрать эпителиальные клетки с конъюнктивы.
Соскоб из прямой кишки: зонд ввести в анальное отверстие на глубину 3-4 см и вращательным движением собрать материал.

1.2.2. Мазки
Одноразовым стерильным зондом с ватным тампоном или щеточкой взять небольшое количество отделяемого (со сводов влагалища, из зева, носоглотки и др.) и перенести в стерильную пробирку типа эппендорф с транспортным раствором (см. раздел 1.1.).

1.2.3. Кровь
Для исследований методом ПЦР кровь должна быть нативной (не свернувшейся).
Забор крови - в пробирку с ЭДТА с сиреневой крышкой (гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя!), аккуратно перемешать, плавно переворачивая пробирку.
Кровь с ЭДТА является биоматериалом для следующих групп исследований:

• молекулярно-генетические исследования (момент забора крови значения не имеет).
• выявление возбудителей инфекций (наиболее информативными являются пробы, взятые при ознобе, повышенной температуре, т.е. предположительно во время виремии или бактериемии).

1.2.4. Моча
В пустой стерильный контейнер с плотно завинчивающейся крышкой собирают утреннюю первую или среднюю порцию мочи в количестве минимум 10 мл. Если забор мочи проводят днем, то перед этим пациент не должен мочиться 1,5-3 часа.

1.2.5. Мокрота
Утром провести санацию ротовой полости и горла (прополоскать раствором питьевой соды). Собрать мокроту в пустой стерильный широкогорлый флакон.

1.2.6. Биоптат
Взятие материала осуществлять из зоны предполагаемого местонахождения возбудителя инфекции, из поврежденной ткани или пограничного с повреждением участка. Поместить биоптат в стерильный контейнер или пробирку со стерильным физраствором или водой (если биоптат находится в биологической жидкости, то в пустой стерильный контейнер или пробирку).

1.2.7. Слюна, желудочный сок, ликвор, синовиальная жидкость, сперма
1-5 мл поместить в пустую стерильную пробирку (контейнер).

1.2.8. Сок предстательной железы
После массажа предстательной железы сок собирают в количестве 0,5-1 мл в пустую стерильную пробирку (контейнер). При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи в количестве не более 10 мл (в этой порции содержится сок предстательной железы).

1.2.9. Смывы, бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ)
Стерильным ватным тампоном и 5-7 мл физиологического раствора проводят смыв, например, с наконечника эндоскопа или бронхоскопа, и помещают в пустую стерильную пробирку (контейнер).

1.2.10. Фекалии
Зонд с ватным тампоном помещают внутрь каловых масс и слегка проворачивают, захватывая небольшое количество материала («со спичечную головку»). Затем материал помещают в стерильную пробирку типа эппендорф с транспортным раствором. Можно взять фекалии (1-5 г) в стерильный пустой контейнер.

1.3. Правила хранения биологического материала для исследований методом ПЦР


1.3.1. Мазки, соскобы:

• в холодильной камере (+4⁰С - +8⁰С) до 7-и суток;
• в морозильной камере (-20⁰С) до 14 суток (допускается только однократное размораживание!).

1.3.2. Моча: в холодильной камере (+4⁰С - +8⁰С) не более 1-х суток;

1.3.3. Кровь с ЭДТА: в холодильной камере (+4⁰С - +8⁰С) - для определения возбудителей инфекций - не более 1-х суток; для генетических исследований – до 4-х суток. Замораживанию не подлежит.

1.3.4. Мокрота: в холодильной камере (+4⁰С - +8⁰С) не более 1-х суток.

1.3.5. Биоптаты:

• в холодильной камере (+4⁰С - +8⁰С) не более 1-х суток,
• в морозильной камере (-20⁰С) до 2-х недель.

1.3.6. Сок предстательной железы, сперма: в холодильной камере (+4⁰С - +8⁰С) не более 1-х суток.

1.3.7. Синовиальная жидкость и др. биологические жидкости: в холодильной камере (+4⁰С - +8⁰С) не более 1-х суток.

1.3.8. Фекалии: хранению не подлежат, доставить в лабораторию в день забора до 15.00, кроме пятницы и предпраздничных дней, при +4⁰С - +8⁰С

2. Правила взятия, хранения и транспортировки крови для общеклинических, биохимических, иммунохимических исследований и исследований системы гемостаза

• При заказе исследований системы гемостаза дни забора биоматериала предварительно согласовываются с Лабораторией.
• Исследованию подлежит сыворотка, не содержащая примеси эритроцитов, бактериальных проростов, хилёза, гемолиза.
• При наличии любого из указанных признаков сыворотка уничтожается и назначается повторное взятие крови.

2.1. Общие рекомендации

2.1.1. Накануне взятия крови исключить физические нагрузки, стрессовые ситуации, физиотерапевтические процедуры; прием лекарственных средств (решение об отмене медикаментозного лечения принимает лечащий врач), оральных контрацептивов; употребление спиртных напитков и жирной пищи. Непосредственно перед исследованием не курить.

2.1.2. Перед сдачей общего и клинического анализов крови последний прием пищи может быть не ранее чем за 3 часа до забора крови.

2.1.3. Для проведения тестов липидного профиля (холестерин, ЛПВП, ЛПНП, триглицериды) следует сдавать кровь строго натощак, после 12-часового голодания.

2.1.4. Для определения в крови глюкозы, фолиевой кислоты, сывороточного железа, билирубина, калия, фосфора следует обязательно выдерживать минимум 6-ти часовое голодание.

2.1.5. Для определения АКТГ, кортизола кровь сдают только до 10:00.

2.1.6. Для определения уровня мочевой кислоты в предшествующие исследованию дни необходимо отказаться от пищи богатой пуринами (печень, почки), максимально ограничить в рационе мясо, рыбу, кофе, чай.

2.1.7. При исследовании функции щитовидной железы в период лечения препаратами, содержащими гормоны ЩЖ, исследование проводится через 24 ч. после последнего приема препарата; за 2-3 дня до взятия крови исключить прием препаратов, содержащих йод.

2.1.8. При исследовании ПСА за неделю до анализа исключить любые манипуляции с предстательной железой.

2.1.9. При исследованиях системы гемостаза на фоне приема препаратов, влияющих на свертывание крови, необходимо отметить это в направлении.

2.2. Особенности взятия биоматериала


2.2.1. Взятие крови производят утром, натощак (во избежание хилёзности, т.е. мутности сыворотки), в условиях физиологического покоя. Перед забором крови пациенту необходимо предоставить 15-минутный отдых.

2.2.2. Стандартный забор крови из вены в пробирку для получения сыворотки: взятие крови осуществляют в процедурном кабинете ЛПУ, в положении пациента «сидя» или «лёжа», из локтевой вены с соблюдением правил асептики и антисептики. Кровь собирают в стерильную сухую пробирку, шприц-моновет или вакуумную пробирку (Vacutainer®, Vacuette®) с красной крышкой. При исследованиях системы гемостаза для предотвращения активации свертывания крови компрессия вены не должна превышать 1 минуту.

2.2.3. Для получения сыворотки венозная кровь отстаивается до полного свертывания. После образования фибринового сгустка пробирку центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин.
Надосадочную жидкость желтого цвета (сыворотку) осторожно переносят пипеткой в пустую пробирку с крышкой.

2.2.4. Ренин/ангиотензин-1, АКТГ, паратгормон - забор крови в пробирку с ЭДТА с сиреневой крышкой, плавно перемешать. Не центрифугировать! Забор биоматериала предварительно согласовывается с Лабораторией. После взятия крови пробирку поместить в емкость со льдом. Доставка в Лабораторию в день взятия крови.

2.2.5. Кальцитонин, остеокальцин: стандартный забор крови в пробирку с красной крышкой для получения сыворотки. Забор биоматериала предварительно согласовывается с Лабораторией. После взятия крови пробирку поместить в емкость со льдом. Доставка в Лабораторию в день взятия крови.

2.2.6. Гликированный (гликозилированный) гемоглобин - забор крови в пробирку с ЭДТА с сиреневой крышкой, плавно перемешать. Не центрифугировать! Доставка в Лабораторию в день взятия крови.

2.2.7. Гематологические исследования:

Клинический анализ крови (анализатор - 22 показателя, СОЭ, лейкоцитарная формула) - забор крови в пробирку с ЭДТА с сиреневой крышкой и в пробирку с цитратом Nа с черной крышкой (для определения СОЭ). Пробирку с цитратом Nа с черной крышкой тщательно перемешать! Доставка в Лабораторию в день взятия крови.

Общий анализ крови (анализатор - 22 показателя, лейкоцитарная формула, ретикулоциты) - забор крови в пробирку с ЭДТА с сиреневой крышкой. Доставка в Лабораторию в день взятия крови.
СОЭ - забор крови в пробирку с цитратом Nа с черной крышкой, тщательно перемешать! Доставка в Лабораторию в день взятия крови.

2.2.8. Исследования системы гемостаза - забор крови в пробирку с цитратом Nа с голубой крышкой. Кровь забирать до отметки - при несоблюдении этого правила изменяется соотношение кровь/антикоагулянт, что может отрицательно сказаться на точности результата. Тщательно перемешать! Доставка в Лабораторию в день забора крови до 14:00.

2.2.9. Клиренс эндогенного креатинина (проба Реберга) - забор крови в пробирку с красной крышкой + сбор суточной мочи (рекомедации по сбору мочи – см. ниже).

2.3. Правила хранения крови и сыворотки крови для общеклинических (гематологических) и биохимических исследований

• хранение до момента транспортировки - в холодильной камере (+4⁰С - +8⁰С).
• доставка в Лабораторию в день забора крови в сумках-холодильниках.

2.4. Правила хранения крови и сыворотки крови для иммунохимических исследований

2.4.1. Кровь: в холодильной камере (+4⁰С - +8⁰С) в течение 1-х суток.

2.4.2. Сыворотка крови:

• в холодильной камере при температуре +4⁰С - + 8⁰С в течение 4-х суток;
• в морозильной камере при температуре -20⁰С в течение 2-х недель.

Допускается только однократное размораживание!

2.5. Правила хранения плазмы крови для исследований системы гемостаза

• в холодильной камере (+4⁰С - +8⁰С) - до 6 часов.
• доставка в Лабораторию в день забора крови в сумках-холодильниках.

3. Правила проведения пренатального скрининга

3.1. Оптимальные сроки проведения исследования: I триместр – 10-13 недель беременности; II триместр – 14-20 недель беременности.

3.2. При направлении на исследование необходимо указать индивидуальные данные беременной женщины: возраст (число/месяц/год), вес, результаты УЗИ (КТР, БПР, количество плодов, срок беременности по УЗИ (недели+дни); если имеются - данные о величине шейной складки - NT) с обязательным указанием даты УЗИ и ФИО врача, проводившего УЗИ; наличие дополнительных факторов риска (курение, сахарный диабет, ЭКО), этническая принадлежность.

3.3. Для скрининга II триместра беременности можно использовать данные УЗИ, проведенного в I триместре.

4. Правила проведения глюкозотолерантного теста

4.1. Глюкозотолерантный тест проводится утром, строго натощак!
При подготовке к исследованию в течение 3-х предшествующих дней необходимо придерживаться обычной диеты, без ограничения углеводов (сахар, сладкие напитки, фрукты и т.д.). За 3 дня до проведения теста необходимо отменить прием лекарственных средств: витамин С, салицилаты, оральные контрацептивы, кортикостероиды (решение об отмене медикаментозного лечения принимает лечащий врач). Полное воздержание от приема пищи накануне взятия крови должно длиться не менее 8 ч., но и не более 14 ч. (после последнего приема пищи). Накануне проведения теста необходимо исключить физические нагрузки, стрессовые ситуации, физиотерапевтические процедуры.

4.2. Перед исследованием определяется уровень глюкозы - проведение глюкозотолерантного теста возможно при концентрации глюкозы не более 6,7 ммоль/л.

4.3. Тест осуществляется в 2 этапа. На каждом этапе кровь берется в отдельную вакуумную пробирку с красной крышкой.

4.4. Первое взятие крови производится натощак, после чего пациент принимает заранее подготовленный и тщательно перемешанный раствор 75 г сухой глюкозы на 200 мл воды. Раствор необходимо выпить в течение 5 мин (не более!). Во время проведения исследования нельзя употреблять любые жидкости (кроме воды), принимать пищу, курить. В течение 2-х часов после взятия крови необходимо находиться в состоянии покоя (лежать или сидеть).

4.5. Через 2 часа после приема раствора глюкозы проводится повторное взятие крови.

4.6. Обе пробирки промаркировать, в направлении обязательно указать № пробирки, соответствующий первому (натощак) и второму (после нагрузки глюкозой) забору крови.

4.7. Хранение в холодильной камере (+4⁰С - +8⁰С).

4.8. Доставка в Лабораторию в день проведения исследования.

5. Правила взятия, хранения и транспортировки биоматериала для общеклинических, биохимических и химико-токсикологических исследований мочи

• При заказе данных исследований необходимо оповестить Лабораторию накануне или в день взятия биоматериала до 11:00.
• Хранение биоматериала до момента транспортировки - в холодильной камере (+4⁰С - +8⁰С).
• Доставка в Лабораторию в день забора в сумках-холодильниках.
• Вид биоматериала для каждого исследования указан в прейскуранте по позициям.
• Результаты химико-токсикологических исследований носят информационный характер и не могут являться доказательствами в суде.

5.1. Общие рекомендации

5.1.1. Накануне сдачи анализа рекомендуется не употреблять овощи и фрукты, которые могут изменить цвет мочи (свекла, морковь и пр.), не принимать диуретики.

5.1.2. Перед сбором мочи надо произвести тщательный гигиенический туалет половых органов.

5.1.3. Женщинам не рекомендуется сдавать анализ мочи во время менструации.

5.1.4. Сбор мочи необходимо производить обязательно до различных эндоуретральных и эндовезикальных исследований и процедур. После проведения цистоскопии анализ мочи можно назначать не ранее, чем через 5-7 дней.

5.1.5. При исследовании катехоламинов в течение 3-х дней нельзя применять препараты, содержащие раувольфию, теофиллин, нитроглицерин, кофеин. По возможности не употреблять пищевые продукты, содержащие серотонин (шоколад, сыры, молочные продукты, бананы), алкоголь. Избегать физической нагрузки, стрессов, курения, болевых воздействий, которые могут вызвать физиологический подъем уровня катехоламинов.

5.2. Особенности взятия биоматериала

5.2.1. Правила сбора разовой мочи для общеклинических (общий анализ мочи, анализ мочи по Нечипоренко) и биохимических исследований: сразу после сна, после тщательного туалета наружных половых органов собирают среднюю порцию мочи (50-100 мл) при свободном мочеиспускании. Хранение в холодильной камере (+40С - +80С). Доставка в Лабораторию в день взятия биоматериала.

5.2.2. Правила сбора разовой мочи для химико-токсикологических исследований: мочу собирают в чистый, не использованный ранее контейнер. Примеси гипохлорита, моющих средств и других веществ могут искажать результат. Сразу после сбора моча должна быть помещена в герметичный контейнер с плотной крышкой, предотвращающей испарение и окисление. Контейнер для сбора мочи следует заполнить полностью для предотвращения испарения под крышкой. Хранение в холодильной камере (+40С - +80С). Доставка в Лабораторию в день взятия биоматериала.

5.2.3. Правила сбора суточной мочи для биохимических исследований: в 07:00 опорожнить мочевой пузырь, но мочу не собирать и записать время. Следующие порции собирать в одну и ту же ёмкость. Для лучшей сохранности в течение всего времени сбора мочу хранить в холодильной камере (+40С - +80С), так как при комнатной температуре существенно снижается содержание глюкозы. Последняя порция мочи собирается в 07:00 следующего дня. Перемешать собранную за сутки мочу и измерить общий объём; записать общую цифру (в миллилитрах). Отобрать 50-100 мл в сухую, чистую пластиковую или стеклянную тару с завинчивающейся крышкой. Доставка в Лабораторию в день взятия биоматериала. В направлении указывается объём суточной мочи, время сбора.

5.2.4. Правила сбора мочи для исследования по Зимницкому: условием правильного проведения пробы, позволяющим оценивать состояние концентрационной способности почек, является исключение избыточного потребления жидкости, т.е. исследование проводится при обычном питьевом режиме (1,0-1,5 л. в сутки), но учитывается суточное количество выпитой жидкости.
Например: в 06:00 пациент опорожняет мочевой пузырь (эта порция выливается!). Затем точно каждые 3 часа (с 09:00 и до 06:00 следующего утра)